二硫鍵廣泛存在與蛋白結構中 ，對穩定蛋白結構具有非常重要的意義 ，二硫鍵一般是通過序列中的2個Cys的巰基 ，經氧化形成 。形成二硫鍵的方法很多 ：空氣氧化法 ，DMSO氧化法 ，過氧化氫氧化法等 。二硫鍵的合成過程 ，可以通過Ellman檢測以及HPLC檢測方法對其反應進程進行監測 。
如果多肽中隻含有1對Cys ，那二硫鍵的形成是簡單的 。多肽經固相或液相合成 ，然後在pH8-9的溶液中進行氧化 。
當需要形成2對或2對以上的二硫鍵時 ，合成過程則相對複雜 。盡管二硫鍵的形成通常是在合成方案的最後階段完成 ，但有時引入預先形成的二硫化物是有利於連合或延長肽鏈的 。通常采用的巰基保護基有trt, Acm, Mmt, tBu, Bzl, Mob, Tmob等多種基團 。
二硫鍵反應條件選擇
二硫鍵即為蛋白質或多肽分子中兩個不同位點Cys的巰基（-SH）被氧化形成的S-S共價鍵 。 一條肽鏈上不同位置的氨基酸之間形成的二硫鍵 ，可以將肽鏈折疊成特定的空間結構 。多肽分子通常分子量較大 ，空間結構複雜 ，結構中形成二硫鍵時要求兩個半胱氨酸在空間距離上接近 。 此外 ，多肽結構中還原態的巰基化學性質活潑 ，容易發生其他的副反應 ，而且肽鏈上其他側鏈 也可能會發生一係列修飾 ，因此 ，肽鏈進行修飾所選取的氧化劑和氧化條件是反應的關鍵因素 ， 反應機理也比較複雜 ，既可能是自由基反應 ，也可能是離子反應 。反應條件有多種選擇 ，比如空氣氧化 ，DMSO氧化等溫和的氧化過程 ，也可以采用H2O2 ， 汞鹽等激烈的反應條件 。
空氣氧化法 ：
空氣氧化法形成二硫鍵是多肽合成中最經典的方法
，通常是將巰基處於還原態的多肽溶於水中
，在近中性或弱堿性條件下（PH值6.5-10）
，反應24小時以上
。為了降低分子之間二硫鍵形成的可能
，該方法通常需要在低濃度條件下進行
。
碘氧化法 ：
將多肽溶於25%的甲醇水溶液或30%的醋酸水溶液中 ，逐滴滴加10-15mol/L的碘進行氧化 ，反應15-40min 。當肽鏈中含有對碘比較敏感的Tyr、Trp 、Met和His的殘基時 ，氧化條件要控製的更精確 ，氧化完後 ，立即加入維生素C或硫代硫酸鈉除去過量的碘 。
二對及多對二硫鍵成環策略當序列中有兩對或多對二硫鍵需要成環時 ，通常有兩種情況 ：
自然隨機成環:
序列中的Cys之間隨機成環 ，與一對二硫鍵成環條件相似
定點成環 ：
定點成環即序列中的Cys按照設計要求形成二硫鍵 ，反應過程相對複雜 。在固相合成多肽之前 ，需要提前設計幾對二硫鍵形成的順序和方法路線 ，選擇不同的側鏈 巰基保護基 ，利用其性質差異 ，分步氧化形成兩對或多對二硫鍵 。通常采用的巰基保護 基有trt, Acm, Mmt, tBu, Bzl, Mob, Tmob等多種基團 。
